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本生闡述:影響ELISA試劑盒試驗(yàn)成果的要素
ELISA試劑盒,即酶聯(lián)免疫法。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn),并具有操作簡(jiǎn)潔、無(wú)放射性危害的優(yōu)點(diǎn),因此多年來(lái)廣泛應(yīng)用于各高校、醫(yī)院、血站和科研機(jī)構(gòu)的試驗(yàn)室中。
影響ELISA試驗(yàn)的要素有如下三方面:
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)下降或失活,成果不易判別。再有ELISA試劑盒靈敏度高,對(duì)雜質(zhì)的反響靈敏度也高,試驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽(yáng)性;
2、酶結(jié)合物濃度過(guò)高,也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。
二、試驗(yàn)儀器
1、加樣器是否通過(guò)校正,酶免測(cè)定血清用血量很少,如手工加樣器的功能不好,吸取樣品不,會(huì)使成果忽高忽低;
2、每次洗板前,應(yīng)查看洗板機(jī)針孔有無(wú)阻塞。
三、ELISA試劑盒操作
1、檢測(cè)前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后運(yùn)用,試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏,避免形成試驗(yàn)成果假性下降;
2、加樣時(shí)留意勿觸及包被板底部,避免擦傷包被物使抗體(抗原)掉落而影響試驗(yàn)成果的精確性;
3、洗刷不充分,會(huì)使成果假性增高,過(guò)分洗刷呈假陰性;
4、比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無(wú)異物、無(wú)水汽,特別是冬天板從37℃水浴箱取出時(shí),底部留有水汽,應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高;
5、抗原與抗體反響達(dá)到平衡,依賴(lài)于溫度與時(shí)刻。溫度高于45℃易引起失活及符號(hào)物掉落,溫度低于4℃,影響反響速度。
總歸,由于ELISA試劑盒試驗(yàn)的影響要素較多,在實(shí)踐工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì),避免和排除各種要素的影響,使之得到精確可靠的查驗(yàn)成果。
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